(Citometria a flusso, FCM) è un analizzatore cellulare che misura l'intensità della fluorescenza dei marcatori cellulari colorati. Si tratta di una tecnologia high-tech sviluppata sulla base dell'analisi e dello smistamento di singole cellule. Può misurare e classificare rapidamente le dimensioni, la struttura interna, il DNA, l'RNA, le proteine, gli antigeni e altre proprietà fisiche o chimiche delle cellule e può basarsi sulla raccolta di queste classificazioni.
Il citometro a flusso è costituito principalmente dalle seguenti cinque parti:
1 Camera di flusso e sistema fluidico
2 Sorgente luminosa laser e sistema di modellazione del raggio
3 Sistema ottico
4 Elettronica, sistema di memorizzazione, visualizzazione e analisi
Sistema di smistamento a 5 celle
Tra questi, l'eccitazione laser nella sorgente di luce laser e nel sistema di formazione del fascio è la principale misurazione dei segnali di fluorescenza nella citometria a flusso. L'intensità della luce di eccitazione e il tempo di esposizione sono legati all'intensità del segnale di fluorescenza. Il laser è una sorgente luminosa coerente in grado di fornire un'illuminazione a lunghezza d'onda singola, ad alta intensità e ad alta stabilità. È la sorgente luminosa di eccitazione ideale per soddisfare questi requisiti.
Ci sono due lenti cilindriche tra la sorgente laser e la camera di flusso. Queste lenti focalizzano un raggio laser a sezione circolare emesso dalla sorgente laser in un raggio ellittico a sezione minore (22 μm × 66 μm). L'energia laser all'interno di questo raggio ellittico viene distribuita secondo una distribuzione normale, garantendo un'intensità di illuminazione costante per le cellule che passano attraverso l'area di rilevamento laser. D'altra parte, il sistema ottico è costituito da più set di lenti, fori stenopeici e filtri, che possono essere approssimativamente divisi in due gruppi: a monte e a valle della camera di flusso.
Il sistema ottico davanti alla camera di flusso è costituito da una lente e da un foro stenopeico. La funzione principale della lente e del foro stenopeico (solitamente due lenti e un foro stenopeico) è quella di focalizzare il raggio laser a sezione circolare emesso dalla sorgente laser in un raggio ellittico a sezione trasversale più piccola. Questo distribuisce l'energia laser secondo una distribuzione normale, garantendo un'intensità di illuminazione costante per le cellule nell'area di rilevamento laser e riducendo al minimo l'interferenza della luce diffusa.
Esistono tre tipi principali di filtri:
1: Filtro passa lungo (LPF): consente il passaggio solo della luce con lunghezze d'onda superiori a un valore specifico.
2: Filtro passa-corto (SPF): consente il passaggio solo della luce con lunghezze d'onda inferiori a un valore specifico.
3: Filtro passa banda (BPF): consente il passaggio solo della luce in uno specifico intervallo di lunghezze d'onda.
Diverse combinazioni di filtri possono dirigere i segnali di fluorescenza a diverse lunghezze d'onda ai singoli tubi fotomoltiplicatori (PMT). Ad esempio, i filtri per rilevare la fluorescenza verde (FITC) davanti al PMT sono LPF550 e BPF525. I filtri utilizzati per rilevare la fluorescenza rosso-arancio (PE) davanti al PMT sono LPF600 e BPF575. I filtri per rilevare la fluorescenza rossa (CY5) davanti al PMT sono LPF650 e BPF675.
La citometria a flusso viene utilizzata principalmente per lo smistamento cellulare. Con il progresso della tecnologia informatica, lo sviluppo dell'immunologia e l'invenzione della tecnologia degli anticorpi monoclonali, le sue applicazioni in biologia, medicina, farmacia e altri campi stanno diventando sempre più diffuse. Queste applicazioni includono l'analisi della dinamica cellulare, l'apoptosi cellulare, la tipizzazione cellulare, la diagnosi del tumore, l'analisi dell'efficacia dei farmaci, ecc.
Orario di pubblicazione: 21 settembre 2023
